一. 液體培養(yǎng)法

1. 將指定之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)，一般培養(yǎng)16~24小時(shí)

2. 將噬菌體原液100 μl 與寄主細(xì)菌懸浮液300 μl均勻混合，靜置15分鐘使其感染。

3. 將混合液接至含10 ml新鮮液體培養(yǎng)基的試管中，于適當(dāng)溫度下振蕩培養(yǎng)約8~24小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間依噬菌體之不同而異。

4. 將培養(yǎng)液移入離心管中，以10,000 rpm （5,000 g）離心10分鐘，以沉淀寄主細(xì)菌。

5. 將上清液移至新管中，以0.22μm孔徑之過濾器（filter）去除殘余菌體，即得不含寄主細(xì)菌之噬菌體原液。但因噬菌體原液呈透明狀，無法以肉眼直接判斷其增殖效果，故應(yīng)測定其效價(jià)以確認(rèn)增殖培養(yǎng)之成效。

二. 雙層瓊脂培養(yǎng)法

1. 將指定之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)，一般培養(yǎng)16~24小時(shí)。

2. 將噬菌體原液100 μl 與寄主細(xì)菌懸浮液300 μl均勻混合，靜置15分鐘使其感染。

3. 將混合液加入5 ml 冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養(yǎng)基中，均勻混合后立即平鋪在已倒好的1.8﹪瓊脂培養(yǎng)基平板上。

4. 待平板凝固后移至適當(dāng)溫度之培養(yǎng)箱中，一般培養(yǎng)8~24小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間依噬菌體之不同而異。

5. 以上述相同之步驟制作另一不含噬菌體之對照組。

6. 將培養(yǎng)好的平板與對照組比較其澄清度，一般含噬菌體之平板呈澄清狀，而僅含寄主細(xì)菌之對照組則呈混濁狀。

7. 將含有噬菌體之平板置于 -20℃下4~5小時(shí)后，取出置于室溫下解凍。

8. 將解凍后產(chǎn)生的液體移入離心管中，以10,000 rpm （5,000 g）離心10分鐘以沉淀寄主細(xì)菌。

9. 將上清液移至新管中，以0.22 μm孔徑之過濾器（filter）去除殘余菌體，即得不含寄主細(xì)菌之噬菌體原液。

三. 表面瓊脂培養(yǎng)法

1. 將指定之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)，一般培養(yǎng)16~24小時(shí)。

2. 將寄主細(xì)菌懸浮液3 ml均勻平鋪于1.8﹪瓊脂培養(yǎng)基平板上，靜置2小時(shí)。

3. 將余的寄主細(xì)菌懸浮液吸出，再將噬菌體原液0.3 ml均勻涂抹于平板上。

4. 于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)約16~24小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間依噬菌體之不同而異。

5. 取5 ml 新鮮液體培養(yǎng)基加入平板中，以 L 形玻棒刮洗下平板表面之菌體。

6. 將刮洗下之液體移入離心管中，以10,000 rpm （5,000 g）離心10分鐘以沉淀寄主細(xì)菌。

7. 將上清液移至新管中，以0.22 μm孔徑之過濾器（filter）去除殘余菌體，即得不含寄主細(xì)菌之噬菌體原液。

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